CAR-T細胞治療產(chǎn)品質(zhì)控非臨床研究考慮要點

1、在CAR-T細胞產(chǎn)品的原材料和輔料通常都要考慮哪些因素？

       生產(chǎn)CAR-T細胞產(chǎn)品的原材料是指生產(chǎn)過程中所用的所有生物原材料和化學原材料，它們不是CAR-T細胞產(chǎn)品的目標組成成份，如培養(yǎng)基、PBMC分離試劑、T細胞分選試劑、激活劑、細胞因子(如IL-2、IL-7及IL-15)、血清或血清替代物等。而CAR-T細胞產(chǎn)品的輔料是指其產(chǎn)品配方中所使用的輔助材料，是其細胞產(chǎn)品中的成份，如人血白蛋白、人血小板提取物、凍存液(如DMSO)等。

       一個完整CAR-T細胞產(chǎn)品的制備過程包括基因載體物質(zhì)的制備及CAR-T細胞終產(chǎn)品的制備兩個大的生產(chǎn)環(huán)節(jié)，同時，載體物質(zhì)的制備又包括質(zhì)粒載體制備和/或病毒載體制備工藝過程，因此，在考慮選擇原材料時，不僅要考慮CAR-T細胞產(chǎn)品制備過程中所用的原材料，也要考慮基因載體物質(zhì)制備過程中所用的原材料(不包括生產(chǎn)的起始原材料，如細胞基質(zhì)和菌毒種)，如細菌及細菌培養(yǎng)基、牛血清、添加因子、轉(zhuǎn)染試劑(如鈣轉(zhuǎn)試劑、PEI、Lipo2000等)以及核酸酶等等。如果在CAR-T細胞產(chǎn)品生產(chǎn)過程中還使用了自制的試劑和材料，還要考慮制備這些自制試劑中的原材料。

       在早期的基礎(chǔ)研究時，研究者對原材料及輔料的關(guān)注可能不足，但由于原材料和輔料對產(chǎn)品的質(zhì)量及安全性均有重要影響，因此，一旦準備進入產(chǎn)品開發(fā)階段，研發(fā)人員就要盡早開展原材料及輔料的評估及篩選，而且在臨床過程中要進一步開展相關(guān)的研究，在確證性臨床前應完成充分的質(zhì)量評估工作。

2、轉(zhuǎn)導/轉(zhuǎn)染T細胞的病毒載體/質(zhì)粒載體是否可按照原材料管理？

       CAR-T細胞是基因治療的ex vivo方式，通過病毒載體轉(zhuǎn)導或質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染，將CAR基因轉(zhuǎn)入T細胞中從而獲得CAR-T細胞，雖然它們未轉(zhuǎn)染的部分在后續(xù)的T細胞擴增及洗滌過程中經(jīng)驗證可被去除，但其所攜帶的遺傳物質(zhì)則是CAR-T細胞的重要組成部分且是使T細胞具有腫瘤殺傷活性的重要基礎(chǔ)，這一點與生產(chǎn)中所用的原材料的特性*不同，其質(zhì)量對CAR-T細胞具有重要影響，因此，轉(zhuǎn)導/轉(zhuǎn)染T細胞的病毒載體/或質(zhì)粒載體按照產(chǎn)品的理念進行管理更為合理。

      但同時也還需要考慮到，也正是因其不直接進入患者體內(nèi)，在后續(xù)的細胞擴增及CAR-T制劑工藝中會有稀釋或洗滌步驟，因此，通過驗證可證明后續(xù)工藝可以降低其殘留的風險，則可以結(jié)合工藝驗證的結(jié)果制定更為合理的質(zhì)量控制標準。

3、如何進行原材料和輔料的選擇和風險控制？

       在CAR-T細胞制備過程中使用的原材料有藥用級別的(如IL-2)，也有非藥用級別的(如IL-7)；有的原材料在國外被批準用于藥品生產(chǎn)，但尚未在國內(nèi)獲得注冊，如某種CD3/CD28磁珠；有的同一種試劑分別存在藥用級別和非藥用級別，非藥用級又分為GMP級別及研究用級別；有的試劑是生物源性材料，如病毒制備中會用到的牛血清和胰酶；有的試劑甚至要自行制備等，面對如此復雜的情況，CAR-T細胞產(chǎn)品的研究者就需要考慮采用何種方法選擇以及控制原材料。

     原材料的選擇是基于風險評估的原則，通常會有以下幾種考慮：

     (1) 在產(chǎn)品研發(fā)早期就開始設計所用原材料的類別并分析其可能的風險，可根據(jù)我國現(xiàn)行版《中國藥典》三部中“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程”及國外相關(guān)技術(shù)要求對原材料的風險等級進行評估并分類，同一種試劑或材料，優(yōu)先選擇低風險級別的，如藥用無菌制劑優(yōu)于藥用制劑，藥用級優(yōu)于非藥用級、GMP級優(yōu)于非GMP級、非動物源性優(yōu)于動物源性材料等；

      (2) 根據(jù)對每一種原材料風險評估的結(jié)果建立相關(guān)的質(zhì)量檢測項目、檢測方法及放行標準，并在產(chǎn)品研發(fā)過程中不斷分析關(guān)鍵原材料質(zhì)量對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，并不斷改進關(guān)鍵原材料的質(zhì)量要求。

     (3) 對于研究級別的生物源性的原材料，不僅要設置它們的安全性質(zhì)控項目，如無菌、內(nèi)毒素、支原體、分枝桿菌及外源病毒污染的檢測等，還要考慮它們的純度、效價或?qū)毎罨⒃鲋车纳飳W效力的質(zhì)控項目。動物源性材料的質(zhì)量控制，如牛血清，需至少按照已有的國家標準或要求進行原材料質(zhì)控及放行；

     (4) 對于自行研制的原材料，如某種特殊要求的細胞因子，不僅需要建立質(zhì)量標準，還需要有制備工藝及其工藝驗證等數(shù)據(jù)支持，有的高風險的原材料甚至可能還會要求開展動物體內(nèi)的安全性評估。此類原材料的檢測要求需要根據(jù)其使用方式、下游工藝的清除驗證數(shù)據(jù)以及潛在風險來確定。

      輔料的選擇及控制要求同樣是基于風險評估的原則，因輔料是與CAR-T產(chǎn)品一同進入患者體內(nèi)，因此，選擇低風險的輔料以及嚴格控制輔料風險是基本原則，如一種輔料同時存在幾種風險等級來源時，應選用風險等級低的輔料；對于高風險等級的輔料，應在產(chǎn)品研發(fā)的早期評估使用這些輔料的必要性，并尋找其他替代物或替代來源。

4、在載體物質(zhì)或CAR-T細胞終產(chǎn)品中是否需要進行原材料殘留的質(zhì)量檢測？

       在載體物質(zhì)或CAR-T細胞終產(chǎn)品中是否進行原材料的殘留控制，主要考慮兩個方面，一個是根據(jù)原材料的風險級別，評估載體純化工藝或CAR-T細胞制備工藝對其去除能力，二是對于風險高的原材料除了評估去除能力外，還需要在載體或CAR-T細胞產(chǎn)品制備的適工藝階段或終產(chǎn)品終進行殘留量檢測的控制并建立控制標準，如慢病毒工藝中使用的降解DNA的核酸酶Benzonase的殘留控制，牛血清白蛋白殘留量的檢測等。

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